病理诊断行业深度报告：追本溯源长期被忽略的“医学之本”（76页）.pdf

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1、 烤片：将带有蜡的组织切片黏在载玻片上，以免染色过程中切片脱落 脱蜡和水化：通过二甲苯进行脱蜡，然后使用下行梯度乙醇将组织中二甲苯替代出来 抗原修复：部分抗原肽链经过此前步骤处理后发生扭曲，无法在免疫组化染色过程中显示，因而需利用化学试剂或热作用将被封闭抗原重新暴露 细胞膜打孔：使用脂溶性试剂将细胞膜穿孔，增加细胞膜对抗体的渗透性(检测细胞膜抗原时可免去此步骤) 灭活内源性酶及封闭内源性生物素：防止底物H202分解，DAB沉淀 非免疫血清封闭：利用与二抗种属相同的非免疫血清封闭电荷，阻止一抗与之结合，抑制非特异性背景着色，防止抗体被组织切片中富有电荷的胶原和结缔组织成分吸附 一抗孵育：按照推荐

2、浓度做梯度稀释，确定最适浓度 二抗孵育：加入选择与一抗种属匹配的二抗进行孵育 显色：滴加显色剂，一般选用DAB或AEC 复染：使用苏木精等普通染料对切片进行复染，使切片清晰显示组织结构，便于准确定位 封片免疫组化染色中使用的抗体主要分为一抗、二抗。一抗是可与抗原特异性结合的抗体。一抗种类包括单克隆抗体和多克隆抗体，主要作用在于识别出试验所需检测的物质;二抗可与一抗特异性结合，即抗体的抗体。二抗针对某一特定物种产生的所有抗体均具有特异性，二抗上通常标记酶、荧光基团等物质用于后续显色或发光。二抗的作用在于检测一抗的存在、放大一抗的信号。根据是否选用二抗以及二抗标记物类型可形成多种不同的检测系统，目前生物素法以及酶标聚合物法使用较为广泛。显色系统：亦包含多种类型，其中HRP-DAB应用最为广泛。免疫组化染色中使用的抗体主要分为一抗、二抗。一抗是可与抗原特异性结合的抗体。一抗种类包括单克隆抗体和多克隆抗体，主要作用在于识别出试验所需检测的物质;二抗可与一抗特异性结合，即抗体的抗体。二抗针对某一特定物种产生的所有抗体均具有特异性，二抗上通常标记酶、荧光基团等物质用于后续显色或发光。二抗的作用在于检测一抗的存在、放大一抗的信号。根据是否选用二抗以及二抗标记物类型可形成多种不同的检测系统，目前生物素法以及酶标聚合物法使用较为广泛。显色系统：亦包含多种类型，其中HRP-DAB应用最为广泛。